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  • 健児 村田

関節軟骨からTotal RNAの採取方法

最終更新: 2020年12月29日


問題点

・ラット関節軟骨自体の組織片が少ない

・効率的かつ手順工夫がないとTotal RNAの収量が少なくなる


利用したKit

QIAGEN  RNeasy Plus Universal Kits


基本的手順はマニュアルに準ずる

1)ラット脛骨関節軟骨をメス10を利用して採取する

2)1.5mlチューブにKit付属のQIAzol 500ulを準備する

3)採取した脛骨関節軟骨を2)のチューブ内にいれる

4)ホモジナイズをパワーホモジナイザー ハンディー型 S-203で30秒程度実施する

5)1.5mlチューブにKit付属のQIAzol 400ulを追加する

6)以後はマニュアルに準ずる


A260/A280吸光度比

従来法の場合     1.545(8サンプルの平均値)

上記に記載した方法  1.863(6サンプルの平均値)

尚、直接QIAzol にいれず、生理食塩水でホモジナイズした後、遠心をした軟骨ペレットでの場合、1.64と良い成果は得られていない


この結果、上記の方法が最も適切である




#RNA #生化学

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