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  • 健児 村田

軟骨細胞分散法

利用する消耗品・機器

・実験動物(4週齢ラット)

・1.5mlチューブ

・15ml遠沈管

・遠心機

・恒温機


利用する試薬

・Collagenase D(Sigma)

・分散用D-MEM

・培地DMEM(Pen-Step、10%FBS含)


分散方法

1). 分散用コラゲナーゼD/DMEM溶液を作成する(3mg/ml)

2). 37℃に温めておきながら、ラットから関節軟骨を採取する

3). 採取した軟骨は、1.5mlチューブに分注された分散用コラゲナーゼD/DMEM溶液でミンスする

4). 37℃で6時間攪拌する

5). 100g遠心3分間後に、上澄みを破棄し、合計3mlとなるように培地を混合する

6). 6, 24, 48Wellプレートに播種する

7). 約2-3週間、経過を観察しながら、培地交換等を実施していく

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