健児 村田
軟骨細胞分散法
利用する消耗品・機器
・実験動物(4週齢ラット)
・1.5mlチューブ
・15ml遠沈管
・遠心機
・恒温機
利用する試薬
・Collagenase D(Sigma)
・分散用D-MEM
・培地DMEM(Pen-Step、10%FBS含)
分散方法
1). 分散用コラゲナーゼD/DMEM溶液を作成する(3mg/ml)
2). 37℃に温めておきながら、ラットから関節軟骨を採取する
3). 採取した軟骨は、1.5mlチューブに分注された分散用コラゲナーゼD/DMEM溶液でミンスする
4). 37℃で6時間攪拌する
5). 100g遠心3分間後に、上澄みを破棄し、合計3mlとなるように培地を混合する
6). 6, 24, 48Wellプレートに播種する
7). 約2-3週間、経過を観察しながら、培地交換等を実施していく