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  • 健児 村田

組織からのタンパク質抽出

ACLからのタンパク質の抽出


利用する試薬

・T-PER Mammalian Protein Extraction ReagentまたはLIPA buffer

・Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (Product No.

87785)


カクテルを作成する:M-PERにInhibitor Cocktail, EDTA-Free x100を混合する

1. 1.5mlチューブにカクテルを500μlずつサンプル数分入れておく

2. サンプル採取し、1.5mlチューブに入れる

3. ホモジナイズ(できれば、電動のホモジナイザーを推奨)

4. 1.5mlチューブを4度で約14,000×gで5分間遠心し、ホモジナイズした遺骸靭帯を沈殿

5. 沈殿物を採取しないよう注意深く上清を採取する


適切な濃度にして保管する

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軟骨細胞分散法

利用する消耗品・機器 ・実験動物(4週齢ラット) ・1.5mlチューブ ・15ml遠沈管 ・遠心機 ・恒温機 利用する試薬 ・Collagenase D(Sigma) ・分散用D-MEM ・培地DMEM(Pen-Step、10%FBS含) 分散方法 1). 分散用コラゲナーゼD/DMEM溶液を作成する(3mg/ml) 2). 37℃に温めておきながら、ラットから関節軟骨を採取する 3). 採取した