培養細胞からのタンパク質の抽出

培養細胞からのタンパク質の抽出

利用する試薬

・M-PER Mammalian Protein Extraction ReagentまたはLIPA buffer

・Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (Product No.

87785)

ACL細胞を100mmプレートに播種しておく

コンフルエントに達した時点でタンパク質の抽出を実施する

100mmディッシュで0.5－1ml量のM-PERを利用する

カクテルを作成する：M-PERにInhibitor Cocktail, EDTA-Free x100を混合する

1. 37℃のPBS(-)を1mL加え、ディッシュをかるく揺すってから、アスピレーターでPBS(-)を吸引する

2. 適切な量のM-PERカクテルを100mmディッシュに添加する

3. ヘラで細胞を採取し、ライセートを収集。2mlチューブに移行する

4. サンプルを約14,000×gで5〜10分間遠心分離し、ペレット化する

5. ペレットを採取しないよう注意深く上清を採取する

適切な濃度にして保管する