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  • 健児 村田
    • 3月7日
    • 読了時間: 1分

免疫蛍光細胞染色法（96well plate）

事前準備

免疫蛍光細胞染色をする細胞を播種

細胞の種類にもよるが48時間〜72時間後に以下手順で実施する


全ての手順で細胞を乾燥させずに素早く実施すること

  1. 　培地を20 ul 程度残し、アスピレート

  2. 　洗浄　D -PBS 200 ul x2

  3. 　固定　4％PFA 100 ul RT, 5 min

  4. 　洗浄 0.01% Triton/DPBS 200 ul x2

  5. 　透過処理　0.2% Triton/DPBS 100 ul RT, 5 min。

  6. 　洗浄 0.01% Triton/DPBS 200 ul x2

  7. 　ブロッキング　1% BSA 50 ul RT, 30 min。

  8. 　一次抗体を1% BSA で希釈

  9. 　ブロッキングの1% BSA をアスピレート

  10. 　抗体希釈液 50 ul を添加

  11. 　インキュベーション, 4°C, 3時間〜６時間

  12. 　二次抗体を 1% BSA で希釈

  13. 　二次抗体希釈液　50 ul を添加

  14. 　アルミホイルで遮光, RT, 1 hr。

  15. 　洗浄 0.01% Triton/DPBS 200 ul x3

  16. 　DAPI 50 ul を添加

  17. 　インキュベーション, RT, 5 min。

  18. 　洗浄 DPBS 200 ul x2

  19. 　DPBS を50 ul 添加。

  20. 　顕微鏡で観察・撮影する。




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