健児 村田
免疫蛍光細胞染色法(96well plate)
事前準備
免疫蛍光細胞染色をする細胞を播種
細胞の種類にもよるが48時間〜72時間後に以下手順で実施する
全ての手順で細胞を乾燥させずに素早く実施すること
培地を20 ul 程度残し、アスピレート
洗浄 D -PBS 200 ul x2
固定 4%PFA 100 ul RT, 5 min
洗浄 0.01% Triton/DPBS 200 ul x2
透過処理 0.2% Triton/DPBS 100 ul RT, 5 min。
洗浄 0.01% Triton/DPBS 200 ul x2
ブロッキング 1% BSA 50 ul RT, 30 min。
一次抗体を1% BSA で希釈
ブロッキングの1% BSA をアスピレート
抗体希釈液 50 ul を添加
インキュベーション, 4°C, 3時間〜6時間
二次抗体を 1% BSA で希釈
二次抗体希釈液 50 ul を添加
アルミホイルで遮光, RT, 1 hr。
洗浄 0.01% Triton/DPBS 200 ul x3
DAPI 50 ul を添加
インキュベーション, RT, 5 min。
洗浄 DPBS 200 ul x2
DPBS を50 ul 添加。
顕微鏡で観察・撮影する。
